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主题:PCR技术三十周年纪
admin发表于 2014-12-29 09:33
数字PCR(ddPCR)系统,Fluidigm公司的qdPCR 37K™ IFC系统,以及RainDance Technologies的RainDrop数字PCR系统。绝大多数数字PCR系统的工作原理是,将DNA样品分成大量微小液滴,每个液滴中只含有不超过一个DNA分子,然后再进行计数。据Bio-Rad公司的ddPCR商品化市场经理James Lee介绍,“数字PCR大大提高了灵敏度和精确性,因此ddPCR特别适用于绝对定量、检测拷贝数变异和罕见事件。”Life Technologies的基因分析高级市场开发经理Angelique Habis称,数字PCR具有广阔的应用前景,例如检测癌症样本中的罕见靶标,检测病原体,病毒载量的绝对定量,NGS文库的质控等等。
  直接PCR是PCR领域的又一大创新,该技术无需通常的DNA纯化步骤,可以直接在收集到的样品上进行PCR(如组织和血液)。这要归功于化学领域的突破,“为了能够在这样的条件下进行扩增,聚合酶必须对样品中的PCR抑制剂有相当强的抵抗力,这样的抑制剂包括血液成分等,”Smergeliene说。“持续合成能力强的DNA聚合酶(如Phusion或Phire酶)就具有这样的额外特性,这也是Thermo Scientific直接PCR试剂盒的核心。”此外,EMD Millipore的KOD Xtreme聚合酶也是为检测原始样品而设计的。
  PCR仪之变:随着技术的进步,人们也在不断改进PCR仪的性能。例如,减少PCR所需的样品体积,以便节省宝贵的罕见材料,降低试剂成本,并且减少废弃物对环境的影响。此外,PCR仪的设计重点还在于提高反应效率,同时节省实验室空间。举例来说,Thermo Scientific公司Piko PCR仪的反应体积可以低至5 μL,该公司还提供超薄的微孔板和小管以便达到更好的热传递效果,降低能源的消耗。“该仪器小巧轻便而且噪音低,能帮助用户大大节省时间、试剂、空间和能源,”Thermo Fisher Scientific的产品经理Kari Kataja说。有的PCR仪厂家继续在提高PCR的精确度和可重复性上下功夫,例如Eppendorf。“我们的热模块温度精确性高,均一性好,而且能减少样品的蒸发,”Eppendorf产品经理Kay Koerner说。
  三十年前的人们一定无法想象PCR技术今天的模样,而三十年后的今天PCR技术仍在不断的发展。“三十年前,没人料到DNA复制这样一个简单的概念,会对生物学和人类健康带来如此大的转变,”Foskett说。“现在,高灵敏度低偏好性的全基因组扩增方法,使单细胞基因组分析得以实现,而这将大大推动胚胎植入前遗传学筛查等领域的发展。”人们常说“三十而立”,PCR也在其三十岁生日之际进入了全盛期,开始向人们展示它的真正力量。
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